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答疑解惑丨《细胞培养中的乳酸代谢调节策略》之问题解答

时间:2024年07月26日

上周四倍谙基开展了“中国智造”无血清培养基系列直播课《细胞培养中的乳酸代谢调节策略》。苏爽经理首先介绍了细胞培养中常见的乳酸代谢问题,乳酸代谢异常可能会引起细胞凋亡、活率下降、工艺放大失败和产量下降等等。进而详细介绍了乳酸代谢的调控机制和调控策略,乳酸代谢调控核心是将“碳”元素引导向有氧呼吸途径,从培养基组成和培养工艺参数方面提供了多种调控策略。最后介绍了倍谙基的从研发到大规模生产CHO细胞培养全面解决方案,包括用于CHO瞬转的RapidTrans CHO Kit、用于CHO稳定蛋白表达的Eden系列培养基套组、用于代谢和糖型调节的Tuner调节剂和个性化培养基定制服务。

直播课精彩纷呈,好礼不断,学员更是积极参与,互动热烈,学习氛围浓厚,很遗憾由于时间原因部分学员的问题没有在直播间回答,因此我们将直播课所有问题进行整理统一回答,希望对您有所帮助。如您对细胞培养方面有任何需求或疑问,欢迎联系我们。

 

以下是直播课问题的整理回复:

Q:细胞培养后期乳酸含量没有增加,但是pH降低,可能的原因是?

A:pH下降的因素多种,培养后期也会产生其他游离酸,有文献报导pH下降是培养后期乙酸累积导致的

 

Q:相同物料和工艺,但是有些批次在细胞培养后期出现一定的乳酸积累现象,乳酸含量并不高,但是pH下降很快,可能的原因是?

A:有可能是某物料批间差导致,或是在培养基配置中出现离子析出导致培养效果变化。

 

Q:细胞在培养过程中细胞直径变大的可能原因是,该怎样应对?

A:在CHO细胞流加培养工艺中,在培养前期细胞在对数期快速增长,在培养中后期,细胞增值速度变慢,开始大量生产抗体/蛋白,此时细胞直径会增大,因此在大多数情况下,抗体/蛋白生产阶段情况下细胞直径变大属于正常现象。

 

Q:细胞培养降温时间的选择是否和乳酸代谢有关系,比如在乳酸峰值前还是后降温更合适?

A:降温可以有助于降低对数生长期细胞的乳酸累积峰值(主要是影响糖酵解速率进而影响乳酸累积),但是对于进入平台期和后期的乳酸累积,降温的作用不大。

至于乳酸峰值前还是后降温哪个更合适,没有统一答案,还是要看您具体的工艺而定。

 

Q:细胞培养初期降低pH是否能够缓解后期细胞代谢物的积累?

A:可以一定程度上缓解。但降低pH可以减少补碱量,进而降低培养环境渗透压,降低高渗透压可能对细胞代谢造成不利影响的风险。

 

Q:有些项目乳酸后期积累很多,但细胞生长正常,抗体质量也正常,需要调节乳酸吗?

A:需要结合中试放大数据,如果大规模培养时生长及质量都正常,可以不用进行乳酸调节。如果您对产量还有更高的要求,可以尝试通过调节乳酸提升抗体/蛋白产量。

 

Q:同样的培养工艺,摇瓶的pCO2比反应器的高,可能原因是什么?

A:与反应器pH控制策略,传质等均有关系。

 

Q:乳酸堆积过于严重,对不同产品糖基化影响大吗?

A:可能会有影响,但还是要基于更多的工艺参数来判断产物糖型的影响因素。

 

Q:乳酸的含量,和抗体产量有直接关系么?

A:根据已有数据,乳酸的累积会对抗体产量产生一定影响,通过改善乳酸异常问题会对产量提升有帮助。

 

Q:pH会影响乳酸代谢吗?乳酸消耗型细胞,人为添加乳酸,会改变抗体产量么?

A:pH控制策略可能会影响乳酸代谢。乳酸消耗型细胞人为添加乳酸可能会对抗体产量有影响,但具体需结合案例进行分析。

 

Q:二氧化碳分压过高,可以使用有机酸控PH吗?

A:可以。

 

Q:有机酸对细胞生长代谢和产品质量有影响吗?

A:需要控制添加量,通常对细胞生长代谢和产品质量影响不大。

 

Q:培养基储存容易铜离子析出吗?

A:离子析出一般发生的培养基过滤前,过滤后存储过程析出不常见。

 

Q:Tuner-Lac乳酸调节剂产品相关问题

A:Tuner-Lac乳酸调节剂用于细胞培养后期乳酸代谢调节,是由多种组分组成,添加Tuner-Lac对抗体的电荷异质性、糖型等质量指标没有副作用,对细胞培养后期乳酸代谢,活率维持及蛋白产量的提升有帮助。

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