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倍谙基已针对不同细胞自主研发的近百款目录型无血清培养基，适用于抗体蛋白表达、疫苗生产及细胞与基因治疗等多个领域。
时间：2025年01月28日
在第四期 “胖达课堂 ——CGT 系列讲座” 中，我们邀请到倍谙基生物研发总监陈敏博士为我们带来《间充质干细胞高效培养策略和技术挑战》的主题分享，详细介绍了间充质干细胞（MSC）高效培养的关键要点和策略。在互动环节，学员们积极踊跃地提出各类问题。陈敏博士针对大部分问题都进行了细致入微的解答。然而，由于时间有限，很遗憾未能涉及到所有问题。为此，我们特别对直播间里的问题进行了整理。
提问:不同来源的MSC，在细胞培养上有什么不同？
回答:在培养的操作方面没有较大的差别，但需要注意的是，不同来源的MSC在表面标记物、不同方向分化的潜能存在一定差异。
提问:外泌体生产批次差异大的原因是什么呢？
回答:a、在细胞培养阶段，细胞扩增传代时引入差异；b、在外泌体生产阶段，接种时细胞状态不同引入差异；c、细胞培养和外泌体表达过程引入外源外泌体；d、小规模或非连续式的外泌体收集纯化操作引入差异。
提问:消化完全后细胞是圆形吗？如果边界成多边形正常吗？
回答:在MSC传代过程中，完全消化后MSC应该成圆形，如有边界或多边形有可能是细胞生长异常。
提问:CD培养基添加黏附因子是需要自己购买吗？什么浓度呢？
回答:粘附因子需要自行购买，粘附因子的使用浓度建议使用供应商推荐浓度或通过梯度实验进行确定。
提问:请问化学成分限定（CD）培养基和无异源（Xeno-free）培养基相比，MSC增殖和干性如何?
回答:目前在倍谙基生物研发内部测试结果中，经过倍谙基生物的Omni CD MSC培养基进行扩增后，不会对MSC的生长和干性等性能造成影响。
提问:详细说一下细胞分离，冻存的操作和注意事项，以及冻存液的配方。
回答:不同组织来源的MSC分离方式不同，例如骨髓来源MSC常用密度梯度离心法分离、脐带来源MSC常用组织细胞自然爬出的方法、脂肪来源MSC常用I型胶原酶消化法、胎盘羊膜可用胰酶配合II型胶原酶消化的方法等。
细胞分离的操作注意事项：
1、生物样本应保证新鲜、尽可能缩短样本取得到分离操作的时间，低温运输或暂存；
2、细胞分离过程中建议试剂和培养基中添加适当浓度的抗生素，并在临近铺板前，如细胞过筛后、最后一步细胞离心重悬后吸取少量上清进行无菌测试；分离过程严格按照无菌操作的要求开展；
3、尽可能冻存较早代次细胞，并同时开展细胞鉴定相关的工作。
细胞冻存：
冻存操作与其他细胞基本相同，“慢”冻，细胞收集并在冻存液中重悬后，降温速度要慢。
冻存液可使用传代用培养基添加5-10%的DMSO，或直接使用商业化冻存液产品。
提问:脂肪间充质干细胞的胶原酶怎么终止？
回答:分离脂肪来源MSC时添加胶原酶完成消化作用后，应采用PBS洗涤或培养基洗涤离心的方式去除胶原酶。不建议使用胶原酶进行MSC的日常传代，可能对细胞造成损伤。
提问:脐带或者脂肪来源的MSC的个体差异怎么解决？
回答:因供体不同，组织之间的差异是固定存在的，无法消除。但是可以尽可能选择相似年龄、相似健康状态的供体获取组织，并尽可能将生物样品采样和细胞分离的过程进行标准化控制，对分离得到的细胞生长情况、鉴定结果等进行标准化规定，以避免操作引入更多的差异。
倍谙基拥有专业的技术服务团队，为广大生物制药企业提供从细胞培养工艺开发与优化、培养基配方设
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